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葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)測(cè)試盒微量法

更新時(shí)間:2021-04-27      瀏覽次數(shù):1396

葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)測(cè)試盒微量法
測(cè)定意義:葡萄糖-6-磷酸酶((glucose 6 phosphatase,G6Pase,EC 3.1.3.9)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和細(xì)胞中,是糖異生過(guò)程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶,在保證血糖的動(dòng)態(tài)平衡方面起著重要的作用。

測(cè)定原理:G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖,變旋酶和葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步依次催化NAD+還原生成NADH,在340nm下測(cè)定NADH生成速率,即可反映G6P活性。

 葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)測(cè)試盒微量法
需要的儀器,耗材:分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

樣本處理
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):提取 液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴, 功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液), 進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

3、血清(漿)樣本:直接檢測(cè)。

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